Agregación de péptidos: por qué no se agita un vial
La agregación es la asociación de varias moléculas de un péptido o una proteína en partículas más grandes. Puede ser reversible o permanente, y los agregados suelen perder actividad o comportarse de forma distinta en un ensayo.
La favorecen la agitación y la espuma, porque en la interfase aire-líquido las proteínas se despliegan; los ciclos de congelación y descongelación; las concentraciones altas; y un pH cercano al punto isoeléctrico, donde la molécula tiene carga neta cero y se repele menos. Los péptidos hidrofóbicos o lipidados tienden más a agregarse.
Los agregados grandes se ven como turbidez o precipitado. Los pequeños no se ven y se detectan con cromatografía de exclusión por tamaño o dispersión dinámica de luz. Algunos péptidos forman fibrillas ordenadas tipo amiloide.
Por eso la recomendación general para disolver un liofilizado es añadir el diluyente por la pared y girar el vial con suavidad, sin agitarlo.
Agregación como fuente de variación entre experimentos
Una solución con agregados tiene menos moléculas libres de las que indica su concentración nominal, y los agregados pueden producir efectos propios en células. Es una fuente de variación entre experimentos.
Términos relacionados
- Reconstitución de un liofilizado
- Almacenamiento y estabilidad
- HGH: una proteína sensible a la agitación
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