Contraión en péptidos: TFA y acetato
El contraión es el ion de carga opuesta que acompaña a los grupos cargados de un péptido en su forma sólida. En péptidos purificados por HPLC suele ser trifluoroacetato (TFA), y puede cambiarse por acetato o cloruro.
Los grupos básicos (el extremo amino, la lisina, la arginina y la histidina) están protonados en las condiciones de purificación y necesitan un anión que los neutralice. La cromatografía en fase reversa usa ácido trifluoroacético en la fase móvil, así que el péptido sale como sal de TFA salvo que se haga un intercambio de iones.
El contraión forma parte del peso del polvo. Un péptido con muchas cargas positivas puede llevar una fracción importante de su masa en contraión; los certificados publicados en el sitio lo reportan como porcentaje en peso, con un máximo de 20 %, y en un lote de MOTS-c fue de 14.5 %.
También puede afectar un experimento. En cultivos de osteoblastos y condrocitos, Cornish y colaboradores vieron que el TFA frenaba la proliferación a concentraciones de entre 10⁻⁸ y 10⁻⁷ M, y que la amilina y la calcitonina en sal de TFA hacían proliferar menos a las células que en sal de clorhidrato [1].
Cuándo importa el contraión en un ensayo
En ensayos celulares con concentraciones de péptido por encima del rango nanomolar, el contraión puede confundir la lectura. Conviene anotarlo en la bitácora y, si la pregunta lo exige, usar una sal de acetato o clorhidrato o un control con el contraión solo.
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Fuentes utilizadas
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