Espectrometría de masas: cómo se confirma la identidad
La espectrometría de masas (MS) mide la relación masa/carga de los iones del péptido. La masa observada se compara con la masa teórica calculada a partir de la secuencia; la concordancia dentro de la tolerancia del método respalda la identidad molecular.
Masa teórica frente a masa observada
La secuencia permite calcular una masa de referencia. El equipo mide la relación masa/carga de los iones y el análisis contrasta la masa asignada con la esperada. Una coincidencia respalda la identidad, pero por sí sola no distingue todas las secuencias isómeras; puede requerirse información de fragmentación u otro análisis complementario.
Se usan dos masas de referencia. La masa monoisotópica corresponde a una composición isotópica definida usando el isótopo principal de cada elemento; la masa promedio pondera las abundancias isotópicas. La referencia depende del análisis y de qué señal o envolvente se asigne, no sólo del nombre del equipo. El COA identifica la referencia utilizada.
Por qué la masa no aparece tal cual
| Término del espectro | Interpretación |
|---|---|
| [M+H]⁺ | La molécula se detecta con un protón de más; la masa observada es la del péptido más ~1 |
| Iones multicargados | Un péptido grande aparece con 2, 3 o más cargas a la vez |
| m/z | Masa dividida entre carga: es el eje del espectro, no la masa directa |
| Desconvolución | El cálculo que estima la masa a partir de señales y estados de carga asignados |
| Tolerancia (Da o ppm) | El margen definido para contrastar masa observada y de referencia; no resuelve por sí solo isómeros |
Alcance de la espectrometría de masas
La MS respalda la identidad y puede detectar impurezas relacionadas que cambian la masa, como secuencias truncadas o modificaciones. La HPLC estima la pureza relativa a partir de las señales separadas y detectadas bajo su propio método.
La MS contrasta la identidad mediante la masa observada y el HPLC caracteriza la pureza cromatográfica. El COA reúne ambos resultados porque responden a propiedades analíticas distintas.
Preguntas frecuentes: Espectrometría de masas: cómo se confirma la identidad
¿Qué diferencia hay entre masa monoisotópica y masa promedio?
La masa monoisotópica usa una composición isotópica definida con el isótopo principal de cada elemento; la masa promedio pondera abundancias isotópicas. El análisis debe identificar qué referencia y qué señal se comparan.
¿Por qué la masa observada no es igual a la teórica exacta?
Porque el péptido se detecta ionizado: como [M+H]+ suma la masa de un protón, y los péptidos grandes aparecen con carga múltiple. El software reconstruye la masa real por desconvolución.