Key Conclusions
- La farmacodinamia estudia la relación entre la concentración de una molécula y la respuesta biológica que produce; no debe confundirse con la farmacocinética (lo que el organismo hace con la molécula).
- Afinidad describe la fuerza de unión, potencia la concentración necesaria para un efecto y eficacia la magnitud de la respuesta máxima. Cada propiedad se mide con su propio diseño experimental.
- Un agonista posee afinidad y eficacia (activa el receptor); un antagonista tiene afinidad pero carece de eficacia (bloquea la activación).
- La EC₅₀ (concentración para el 50% del efecto máximo) y la IC₅₀ (concentración inhibitoria) son parámetros dependientes del sistema experimental y no son directamente trasladables entre especies, líneas celulares o tipos de ensayo.
- El control analítico ayuda a comprobar qué material entra al ensayo. La separación cromatográfica y la espectrometría de masas aportan información diferente; ninguna señal aislada garantiza identidad, concentración y actividad a la vez.
- La selectividad del ligando por subtipos de receptor y la reserva de receptores modifican la potencia aparente, y entran en el diseño experimental.
Introducción: La Farmacodinamia como Marco para la Investigación con Péptidos
La farmacodinamia —del griego pharmakon (fármaco) y dynamis (poder)— es la disciplina que estudia los efectos bioquímicos y fisiológicos de las moléculas sobre los organismos vivos, así como los mecanismos de acción y la relación entre la concentración de la sustancia y la respuesta observada. En el contexto de la investigación con péptidos, la farmacodinamia proporciona el marco conceptual para comprender cómo los péptidos bioactivos —ya sean endógenos o sintéticos— interactúan con sus blancos moleculares para producir efectos celulares y tisulares.
La relevancia de la farmacodinamia para la investigación con péptidos es múltiple. En primer lugar, numerosos péptidos actúan sobre receptores acoplados a proteínas G (GPCR), mientras otros actúan sobre receptores catalíticos u otras dianas. En segundo lugar, la comprensión de los conceptos farmacodinámicos —afinidad, potencia, eficacia, selectividad— es esencial para interpretar correctamente los resultados experimentales y para diseñar estudios que permitan distinguir entre efectos específicos y no específicos de los péptidos.
Este artículo proporciona una guía completa sobre los fundamentos de la farmacodinamia aplicada a péptidos, con énfasis en la interpretación de parámetros como EC₅₀, IC₅₀, afinidad y eficacia, y en la importancia del control analítico para interpretar la validez de los resultados experimentales.
Definición de Farmacodinamia: Qué Estudia y Por Qué Importa
La farmacodinamia relaciona la concentración de una sustancia con una respuesta medible bajo condiciones experimentales definidas. El resultado de esta relación depende de múltiples factores:
El blanco molecular (tipo y subtipo de receptor, enzima, canal iónico o transportador)
El tipo de ensayo (funcional, de unión, celular, bioquímico)
La especie y el tejido (humano, roedor, línea celular, tejido nativo)
El tiempo de exposición y las vías de señalización disponibles
Es fundamental distinguir entre farmacodinamia y farmacocinética. Mientras que la farmacocinética describe lo que el organismo hace con la sustancia —absorción, distribución, metabolismo y excreción— a lo largo del tiempo, la farmacodinamia describe lo que la sustancia hace al organismo en términos de efecto medible. Un investigador debe considerar ambas dimensiones: un péptido puede tener alta afinidad por un receptor y degradarse durante una incubación. Si sólo se conoce la concentración añadida, la exposición real puede ser menor y la potencia aparente cambiar. En cultivo, esto exige comprobar estabilidad y exposición; no constituye por sí solo una caracterización farmacocinética del organismo.
Componentes Fundamentales de la Farmacodinamia
La farmacodinamia se articula en torno a cuatro conceptos interrelacionados pero distintos:
| Concepto | Definición | Pregunta que Responde |
|---|---|---|
| Receptor | Blanco molecular que reconoce ligandos específicos | ¿Qué subtipo y especie se estudiaron? |
| Ligando | Molécula que se une al blanco molecular | ¿Con qué afinidad y bajo qué método? |
| Agonista | Ligando que favorece una respuesta del receptor | ¿Cuál fue la respuesta máxima y la EC₅₀? |
| Antagonista | Reduce la respuesta al agonista sin producir el mismo efecto | ¿Fue competitivo, reversible y selectivo? |
Receptores: Blancos Moleculares de los Péptidos
Naturaleza y Clasificación de los Receptores
Los receptores reconocen ligandos y participan en la transmisión de señales. Enzimas, transportadores y canales también pueden ser dianas farmacológicas, pero no son sinónimos de receptor: la clasificación depende de su función y mecanismo. Los receptores pueden localizarse en la membrana celular, en el citoplasma o en el núcleo.
Para la investigación con péptidos, los receptores más relevantes son:
Receptores acoplados a proteínas G (GPCR): La familia más numerosa de receptores de membrana. Muchos péptidos endógenos activan GPCR,.
Receptores de tirosina quinasa: Activados por factores de crecimiento peptídicos.
Receptores nucleares: Sus ligandos conocidos incluyen esteroides, hormonas tiroideas y otros compuestos lipófilos. No constituyen la vía general de reconocimiento de hormonas peptídicas. Que un péptido cambie expresión génica tampoco demuestra unión directa a un receptor nuclear; IUPHAR distingue estas familias por sus ligandos y función.
Canales iónicos regulados por ligando: Algunos péptidos modulan directamente la función de canales iónicos.
Subtipos de Receptores y Selectividad
Para varios neurotransmisores y hormonas peptídicas existen múltiples subtipos de receptores con distribuciones tisulares y funciones fisiológicas distintas. Por ejemplo, los receptores de opioides incluyen los subtipos μ, κ y δ, cada uno con preferencia por diferentes péptidos endógenos (endorfinas, dinorfinas, encefalinas) y con diferentes perfiles de señalización.
La selectividad de un péptido por un subtipo de receptor específico es un parámetro farmacodinámico crítico. Un péptido que no es selectivo puede producir efectos off-target que confunden la interpretación de los resultados experimentales. La selectividad se determina típicamente mediante ensayos de unión competitiva en los que se mide la afinidad del péptido por diferentes subtipos de receptores.
Receptores Huérfanos
Los receptores huérfanos son aquellos para los cuales el ligando endógeno permanece desconocido. La identificación de ligandos para receptores huérfanos es un área activa de investigación que puede revelar nuevos sistemas de señalización peptídica.
Agonistas y Antagonistas: Definiciones y Caracterización
Agonistas: Activadores de la Respuesta
Un agonista es un fármaco o ligando que activa receptores para producir la respuesta deseada, ya sea estimulación o inhibición de la función celular. Para que una molécula actúe como agonista, debe poseer dos propiedades fundamentales:
Afinidad: Capacidad de unirse al receptor.
Eficacia (actividad intrínseca): Capacidad de activar el receptor y generar una respuesta.
Los agonistas convencionales aumentan la proporción de receptores en estado activado, estabilizando la conformación activa del receptor.
Tipos de Agonistas
| Tipo | Característica | Implicación |
|---|---|---|
| Agonista completo | Produce la respuesta máxima del sistema | Se utiliza como referencia para definir la eficacia máxima |
| Agonista parcial | Produce una respuesta máxima menor que la del agonista completo en ese sistema | La eficacia depende del sistema; un agonista parcial en un tejido puede ser completo en otro |
| Agonista inverso | Reduce la actividad constitutiva del receptor | Solo detectable en sistemas con actividad basal del receptor |
| Agonista sesgado (biased) | Activa selectivamente vías de señalización específicas | Exige comparar vías y ligando de referencia; no demuestra por sí solo mayor seguridad clínica |
La distinción entre agonista completo y parcial no es absoluta: depende del sistema experimental, la densidad de receptores y la eficiencia de acoplamiento.
Antagonistas: Bloqueadores de la Respuesta
Un antagonista es un fármaco que previene la activación del receptor por agonistas. Los antagonistas poseen afinidad por el receptor pero carecen de eficacia —se unen al receptor pero no lo activan.
Tipos de Antagonistas
| Tipo | Mecanismo | Característica |
|---|---|---|
| Competitivo reversible | Compite con el agonista por el mismo sitio de unión | Desplazable por altas concentraciones de agonista |
| Competitivo irreversible | Se une covalentemente al sitio de unión | No desplazable; reduce el número de receptores disponibles |
| No competitivo | La inhibición no se supera aumentando el agonista en las condiciones del ensayo | Puede proceder de distintos mecanismos; la forma de la curva no localiza por sí sola un sitio alostérico |
| Modulador alostérico | Se une a un sitio distinto del ortostérico | Puede aumentar, reducir o no cambiar la respuesta; un modulador positivo no se denomina antagonista por ese hecho |
La caracterización de un antagonista requiere determinar:
Selectividad: ¿Antagoniza solo el receptor de interés?
Reversibilidad: ¿Es el efecto reversible o irreversible?
Tipo de antagonismo: ¿Competitivo, no competitivo o alostérico?
Relevancia para Péptidos de Investigación
En la investigación con péptidos, la distinción entre agonistas y antagonistas es fundamental por varias razones:
Mecanismo de acción: Un péptido que actúa como agonista de un receptor producirá efectos diferentes a uno que actúa como antagonista, incluso si ambos se unen al mismo receptor.
Diseño experimental: Los antagonistas ayudan a comprobar la participación de un receptor. La interpretación requiere su selectividad a la concentración usada y, cuando proceda, controles genéticos u otra intervención independiente.
Desarrollo terapéutico: Los agonistas y los antagonistas peptídicos plantean preguntas distintas de ocupación, señalización y duración de respuesta.
Afinidad, Potencia y Eficacia: Conceptos Distintos
La confusión entre afinidad, potencia y eficacia es una fuente común de error en la interpretación de resultados farmacológicos. Estos tres conceptos se miden de forma distinta y no deben mezclarse al interpretar un resultado.
Afinidad: La Fuerza de la Unión
La afinidad describe la tendencia de un ligando a unirse a su blanco molecular. Se cuantifica mediante constantes de disociación:
Kd es la constante de disociación en equilibrio. En el modelo de un sitio, unión reversible y sin cooperatividad, la mitad de los sitios está ocupada cuando la concentración libre del ligando iguala Kd. Una Kd menor indica mayor afinidad en condiciones comparables.
Ki caracteriza la afinidad del inhibidor en el modelo de equilibrio utilizado. No se define como la concentración que ocupa la mitad de los receptores en presencia de radioligando. Obtenerla desde una IC₅₀ competitiva requiere conocer las condiciones y aplicar un modelo apropiado.
La afinidad es una propiedad termodinámica que depende de las interacciones moleculares entre el ligando y el receptor como interacciones iónicas, puentes de hidrógeno e interacciones hidrofóbicas. La unión covalente irreversible exige otro análisis cinético y no se describe sin más mediante una Kd de equilibrio reversible.
La afinidad no predice la eficacia. Un ligando puede tener alta afinidad pero baja o nula eficacia (antagonista).
Potencia: La Concentración Necesaria para el Efecto
La potencia describe cuánta concentración se necesita para alcanzar una respuesta definida. Se cuantifica mediante:
EC₅₀: Concentración que produce el 50% del efecto máximo observado para ese agonista y ese ensayo.
IC₅₀: Concentración inhibitoria que reduce en un 50% una respuesta definida.
La potencia depende de:
La afinidad del ligando por el receptor
La eficiencia del acoplamiento receptor-señal
La densidad de receptores y la reserva de receptores
La amplificación de la señal
La reserva de receptores (receptor reserve o spare receptors) es un concepto crítico: cuando hay más receptores que los necesarios para una respuesta máxima, la potencia aparente de un agonista puede ser mayor que su afinidad predice. Esto significa que la EC₅₀ puede ser menor que la Kd.
Eficacia: La Magnitud de la Respuesta
La eficacia describe la magnitud de respuesta que el ligando puede producir en ese sistema. Se cuantifica mediante:
Emax: Respuesta máxima producida por el agonista
Actividad intrínseca: Proporción de la respuesta máxima del sistema que produce el agonista
La eficacia depende de:
La conformación del receptor estabilizada por el ligando
El acoplamiento a las vías de señalización downstream
El sistema de amplificación de señal
Un agonista parcial tiene menor eficacia que un agonista completo en el mismo sistema.
Comparación de Afinidad, Potencia y Eficacia
| Propiedad | Define | Se Mide con | Depende de |
|---|---|---|---|
| Afinidad | Fuerza de unión | Kd, Ki | Interacciones moleculares ligando-receptor |
| Potencia | Concentración para efecto | EC₅₀, IC₅₀ | Afinidad, acoplamiento, reserva de receptores |
| Eficacia | Magnitud de respuesta | Emax, actividad intrínseca | Conformación inducida, vías de señalización |
Consecuencia práctica: Dos péptidos pueden tener la misma afinidad por un receptor pero diferente potencia (debido a diferente eficacia de acoplamiento) o diferente eficacia (debido a diferente activación conformacional).
Interpretación de EC₅₀ e IC₅₀ en Investigación con Péptidos
EC₅₀: Concentración Efectiva Media
La EC₅₀ es la concentración de un agonista que produce el 50% del efecto máximo observado para ese agonista y ese ensayo. Es un parámetro de potencia, no de eficacia.
Consideraciones críticas para la interpretación de EC₅₀:
Dependencia del sistema: La EC₅₀ no es una propiedad intrínseca del péptido; depende del sistema experimental (tipo celular, densidad de receptores, tiempo de incubación).
No es una dosis: La EC₅₀ es una concentración en el ensayo, no una dosis administrada a un organismo.
No prueba beneficio clínico: Una EC₅₀ baja en un ensayo celular no garantiza eficacia en un organismo completo.
No es directamente trasladable: Los valores de EC₅₀ no pueden trasladarse directamente entre líneas celulares, especies o tipos de ensayo.
IC₅₀: Concentración Inhibitoria Media
La IC₅₀ es una concentración inhibitoria que reduce en un 50% una respuesta definida. Se utiliza para caracterizar antagonistas o inhibidores.
Consideraciones críticas para la interpretación de IC₅₀:
Dependencia de las condiciones: La IC₅₀ depende de la respuesta medida, el agonista o radioligando utilizado y sus concentraciones.
No es equivalente a Kd: La IC₅₀ puede ser mayor o menor que la Kd dependiendo del ensayo.
Contexto experimental: Para una comparación seria, deben conservarse unidades, método, sistema y curva completa.
Curvas Concentración-Respuesta
La curva concentración-respuesta es la representación gráfica fundamental de la farmacodinamia. Una curva completa proporciona:
Efecto basal: Respuesta en ausencia de ligando
EC₅₀: Posición de la curva en el eje de concentraciones
Emax: Meseta de la curva (eficacia)
Pendiente: Coeficiente de Hill del ajuste. Una pendiente distinta de uno no demuestra por sí sola cooperatividad molecular.
Para una interpretación rigurosa, un experimento debe incluir:
Rango de concentraciones que permita reconocer basal, transición y meseta, adaptado al sistema
Curva completa, no solo puntos aislados
Intervalos de confianza de los parámetros y una descripción separada de la variabilidad entre réplicas; desviación estándar y error estándar no son intercambiables
Ejemplos de lectura: ocupación, efecto y concentración inhibitoria
Estos tres ejemplos son hipotéticos; sus números no pertenecen a un péptido del catálogo ni a un ensayo clínico.
En un modelo de unión reversible de un sitio, la fracción ocupada es L/(Kd + L), usando concentración libre L. Si Kd es 10 nM, a 10 nM hay 50% de ocupación y a 90 nM, 90%. Esa cuenta describe unión, no porcentaje de beneficio ni efecto máximo. El modelo operacional de Black y Leff separa afinidad, cantidad de receptores y transducción: ocupación y respuesta no tienen por qué aumentar de la misma forma.
En un mismo ensayo, el agonista A podría alcanzar 100 unidades y tener EC₅₀ de 10 nM; B podría alcanzar 40 unidades y tener EC₅₀ de 1 nM. B llega a la mitad de su propio máximo a menor concentración, pero su máximo sigue siendo 40. Si la pregunta es alcanzar 60 unidades, B no lo logra dentro de ese modelo, aunque su EC₅₀ sea menor. Ordenar sólo por EC₅₀ habría respondido otra pregunta.
La relación de Cheng–Prusoff para inhibición enzimática competitiva simple es Ki = IC₅₀/(1 + S/Km). Con IC₅₀ de 30 nM y S igual a Km, el valor calculado sería 15 nM. Se supone competencia reversible y un modelo cinético apropiado, sin una pérdida relevante de ligando libre. No se aplica esta cuenta automáticamente a un ensayo funcional celular, a inhibición irreversible ni a una mezcla de mecanismos.
El Assay Guidance Manual distingue la IC₅₀ relativa, a mitad del recorrido ajustado entre los extremos de la curva, de una respuesta absoluta del 50%. Si una curva hipotética recorre de 20 a 80 unidades, su punto medio es 50; si recorre de 0 a 40, es 20. Publicar sólo «IC₅₀» omitiendo normalización, extremos y ajuste puede ocultar esa diferencia. Las réplicas técnicas de una misma preparación tampoco sustituyen experimentos independientes.
El Papel del Control Analítico en la Farmacodinamia de Péptidos
Por Qué la Identidad Molecular es Crucial
La farmacodinamia de un péptido depende de su estructura primaria exacta. Un cambio de un solo aminoácido, una modificación post-traduccional incorrecta, o la presencia de fragmentos contaminantes pueden alterar drásticamente la afinidad, potencia o eficacia del péptido.
El control analítico es el puente entre la química del péptido y su farmacodinamia. Sin una caracterización analítica rigurosa, los resultados farmacodinámicos pueden ser erróneamente atribuidos a la molécula incorrecta.
HPLC: Pureza y Perfil de Impurezas
La HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) con detección UV proporciona:
Pureza por área: Fracción de señal integrada atribuida al analito, dentro del método y ventana de integración; no equivale automáticamente a fracción de masa
Perfil de señales: Detección de picos secundarios que requieren caracterización antes de asignarlos a fragmentos o contaminantes
Reproducibilidad entre lotes: Consistencia del perfil cromatográfico
Limitaciones para farmacodinamia:
La pureza por HPLC no garantiza que el péptido tenga la secuencia correcta
Impurezas co-eluyentes pueden estar "ocultas" dentro del pico principal
La pureza química no predice la actividad biológica
LC-MS: Identidad Molecular y Estructural
La LC-MS (cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas) proporciona:
Relación masa/carga y patrón isotópico: Su resolución y exactitud dependen del instrumento; deben interpretarse con carga, aductos y calibración
Perfil de impurezas por masa: Detección de fragmentos truncados o modificados
MS/MS: Evidencia de secuencia mediante fragmentación; la cobertura y las ambigüedades determinan cuánto puede confirmarse
Aplicación a farmacodinamia:
La LC-MS puede detectar variantes del péptido que podrían tener diferente farmacodinamia
La presencia de fragmentos puede explicar actividades aparentemente contradictorias
Métodos para Estudiar Interacciones Ligando-Receptor
Además de HPLC y LC-MS para caracterización del péptido, existen métodos específicos para estudiar la farmacodinamia:
Ensayos de unión a receptor (radioreceptorassay, RRA): Miden la afinidad del péptido por el receptor utilizando ligandos radiactivos.
Ensayos funcionales: Miden la respuesta celular (ej. acumulación de AMPc, movilización de calcio, activación de MAPK).
Cromatografía de afinidad-espectrometría de masas (AC-MS): Permite identificar péptidos que se unen a receptores específicos.
Docking molecular: Predicción computacional de la interacción ligando-receptor.
La combinación de HPLC-MS/MS con ensayos de unión es particularmente poderosa: la HPLC separa las especies peptídicas, la MS ayuda a caracterizarlas y los ensayos de unión detectan fracciones que reconocen la diana. Confirmar activación exige además una medición funcional.
Limitaciones de los Métodos Analíticos y Farmacodinámicos
Lo que el Control Analítico NO Puede Determinar
| Método | NO Determina | Implicación |
|---|---|---|
| HPLC-UV | Identidad molecular, actividad biológica | Un péptido puede ser 98% puro pero inactivo |
| LC-MS (intacta) | Secuencia completa, actividad biológica | La masa correcta no garantiza la secuencia correcta |
| Análisis de aminoácidos | Identidad de secuencia, actividad | La composición correcta no garantiza el orden correcto |
Lo que los Ensayos Farmacodinámicos NO Pueden Determinar
| Ensayo | NO Determina | Implicación |
|---|---|---|
| Ensayo de unión | Eficacia, actividad funcional | Un ligando puede unirse pero no activar |
| Ensayo funcional | Selectividad absoluta | Puede haber efectos off-target no detectados |
| Ensayo en una línea celular | Efecto en tejidos nativos | La señalización depende del contexto celular |
La Importancia del Contexto Experimental
La farmacodinamia de un péptido no es una propiedad absoluta —depende del contexto experimental. Factores que modifican la respuesta observada:
Especie: Receptores humanos vs. de roedor pueden tener diferente afinidad por el mismo péptido
Tejido o línea celular: Diferente expresión de receptores, acoplamiento y vías de señalización
Tiempo de exposición: Efectos agudos vs. crónicos
Concentración: Efectos en diferentes rangos de concentración
Condiciones del ensayo: pH, temperatura, presencia de proteínas plasmáticas
Una comparación seria entre péptidos o entre estudios requiere que se conserven unidades, método, sistema y curva completa.
Validación y Estándares en Farmacodinamia de Péptidos
Validación de Ensayos
La validación debe responder al uso del ensayo. Se evalúan características como las siguientes, con criterios definidos para el sistema y la decisión:
| Parámetro | Qué comprobar |
|---|---|
| Especificidad | Respuesta relacionada con la diana mediante controles complementarios |
| Reproducibilidad | Variabilidad entre experimentos independientes y estabilidad del compuesto de referencia |
| Rango dinámico | Respuesta desde basal hasta Emax |
| Selectividad | Comparación con otras dianas relevantes, concentración del antagonista y posibles efectos propios |
Estándares de Referencia
Para estudios farmacodinámicos con péptidos se recomienda:
Estándar del péptido: Caracterizado por HPLC y LC-MS
Agonista de referencia: Para comparación de eficacia y potencia
Antagonista de referencia: Para confirmación de especificidad
Control positivo y negativo: Para validación del ensayo
Lista Mínima para Revisar un Experimento Farmacodinámico
Un experimento farmacodinámico bien documentado debe incluir:
Blanco molecular y subtipo de receptor
Especie, tejido, línea celular o preparación experimental
Ligando de referencia y tipo de respuesta medida
Rango de concentraciones, unidades y número de réplicas
Curva concentración-respuesta, respuesta máxima e intervalo de incertidumbre
Controles, selectividad y posibles vías alternativas
Matriz de Comparación: Métodos para la Caracterización Farmacodinámica de Péptidos
| Método | Lo que Mide | Lo que NO Mide | Aplicación |
|---|---|---|---|
| HPLC-UV | Pureza por área, perfil de impurezas | Identidad, actividad, selectividad | Control de calidad del péptido |
| LC-MS/MS | Masa, secuencia, modificaciones | Actividad biológica, afinidad | Confirmación de identidad estructural |
| Ensayo de unión (RRA) | Afinidad (Kd, Ki) | Eficacia, actividad funcional | Caracterización de afinidad |
| Ensayo funcional | Potencia (EC₅₀), eficacia (Emax) | Afinidad directa | Caracterización de actividad |
| Ensayo de selectividad | Afinidad por subtipos de receptor | Actividad en sistemas completos | Evaluación de especificidad |
| Docking molecular | Interacciones predichas | Actividad real, cinética | Predicción computacional |
| Ensayo in vivo | Efecto en organismo completo | Mecanismo molecular | Evaluación de eficacia global |
Recomendaciones para Investigadores
Para el Uso de Péptidos en Estudios Farmacodinámicos
Verificar la identidad molecular: Revisar datos y métodos apropiados para el compuesto, con referencias y criterios de aceptación trazables.
Evaluar la composición: La idoneidad depende de la identidad y actividad de las impurezas, su concentración y el ensayo. No hay un umbral de área HPLC que, por sí solo, valide todos los estudios de unión o función.
Conocer la identidad declarada: La masa compatible es una parte de la evidencia; considerar secuencia, modificaciones, isómeros y técnicas complementarias.
Controlar la estabilidad: Verificar que el péptido no se degrada durante el experimento (ej. por HPLC del sobrenadante).
Usar controles apropiados: Incluir agonista de referencia, antagonista selectivo y vehículo.
Para la Interpretación de Resultados Farmacodinámicos
Distinguir entre afinidad, potencia y eficacia: No usar estos términos indistintamente.
Reportar el contexto experimental: Especie, línea celular, condiciones de ensayo.
Incluir curvas completas: No solo EC₅₀ o IC₅₀ aisladas.
Comparar en sistemas equivalentes: No comparar EC₅₀ de diferentes ensayos sin considerar las diferencias metodológicas.
Considerar la reserva de receptores: La potencia aparente puede no reflejar la afinidad real.
Señales de Alerta en Publicaciones
Uso indistinto de "afinidad", "potencia" y "eficacia"
Reporte de EC₅₀ sin curva concentración-respuesta completa
Ausencia de información sobre especie, tejido o línea celular
Comparación de EC₅₀ de diferentes ensayos sin ajuste
Ausencia de controles apropiados para distinguir dependencia del receptor y efectos inespecíficos
Identidad, composición o exposición sin caracterización suficiente para interpretar el ensayo
Referencias
- Black JW, Leff P. Operational models of pharmacological agonism. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 1983;220:141–162. https://doi.org/10.1098/rspb.1983.0093 Buscar fuente ↗
- Cheng Y, Prusoff WH. Relationship between the inhibition constant (Ki) and the concentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition (I50) of an enzymatic reaction. Biochem Pharmacol. 1973;22:3099–3108. https://doi.org/10.1016/0006-2952(73)90196-2 Buscar fuente ↗
- Beck B, Chen YF, Dere W, et al. Assay Operations for SAR Support. Assay Guidance Manual. Actualizado en 2017. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK91994/ Buscar fuente ↗
- Alexander SPH, et al. The Concise Guide to PHARMACOLOGY 2021/22: Nuclear hormone receptors. Br J Pharmacol. 2021. https://doi.org/10.1111/bph.15540 Buscar fuente ↗
- ICH. Q2(R2): Validation of Analytical Procedures. 2023. https://database.ich.org/sites/default/files/ICH_Q2%28R2%29_Guideline_2023_1130.pdf Buscar fuente ↗