Tiempo de retención: cómo se lee en un cromatograma
El tiempo de retención es el tiempo que tarda un compuesto en salir de la columna cromatográfica desde que se inyecta la muestra, medido en el máximo de su pico. En un cromatograma, cada pico corresponde a una sustancia y su área, a la cantidad detectada.
En la HPLC de fase reversa, un péptido se retiene más cuanto más hidrofóbico es, y sale cuando la fase móvil alcanza suficiente proporción de disolvente orgánico. El tiempo depende de la columna, la fase móvil, el gradiente, el flujo y la temperatura; por eso sólo se compara entre corridas hechas con el mismo método.
El eje horizontal del cromatograma es el tiempo y el vertical, la absorbancia del detector. La pureza es el cociente entre el área integrada del pico principal y la de todos los picos juntos.
Que un pico salga al mismo tiempo que un estándar de referencia apoya su identidad, pero no la demuestra: dos compuestos distintos pueden coeluir. Para identidad se usa la espectrometría de masas.
Qué aporta el tiempo de retención al leer un cromatograma
Leer un cromatograma permite ver lo que un porcentaje resume: si hay hombros pegados al pico principal, si la línea base es limpia y si las impurezas están separadas o escondidas bajo el pico.
Términos relacionados
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